Vous concevez des immunothérapies innovantes afin de lutter contre certaines maladies.
Vos années de recherche et développement vous ont permis de développer une lignée cellulaire produisant un anticorps spécialement ciblé afin de lutter efficacement contre une maladie.
Nous sommes dans la capacité de déterminer les séquences nucléotidiques codant pour les différente chaînes de cet anticorps, vous permettant ainsi de les conserver et de reproduire la molécule d'intérêt, ceci même si votre lignée venait à disparaître.
La mise au point en interne de deux méthodologies nous permet de répondre à toutes demandes concernant le séquençage d'anticorps comme par exemple :
- Le séquençage des régions variables des chaînes légères et constantes
- La détermination de la séquence de la région "leader" de votre anticorps
- Le séquençage complet des régions constantes des chaînes lourdes et/ou légères
- L'analyse de cellules produisant des anticorps polyclonaux ...
A partir de cellules en culture ou en culot sec, nous effectuons une extraction des ARNs totaux sur lesquels est réalisé une RT-PCR. Cette réaction nous permet d'obtenir des fragments d'ADNc qui seront amplifiés puis clonés dans un vecteur.
Les bactéries transformées à l'aide ce vecteur seront screenées en vue de séquencer les inserts par méthode Sanger.
Les séquences doivent être vérifiées sur plusieurs clones afin d'être validées. Le nombre de validation dépend du nombre de clones obtenus.
Un rapport contenant les différentes séquences retrouvées dans les cultures vous est transmis.
Le rapport fourni contient selon vos demandes :
- Les séquences nucléotidiques annotées des domaines des chaînes lourdes et légères selon votre besoin
- Les séquences protéiques correspondantes
- Une confirmation théorique de la productivité des chaînes lourde ou légère par bio-informatique
- S'il y a lieu les autres séquences nucléotidiques et protéiques productives déterminées lors du séquençage des clones bactériens
A partir de cellules en culture, nous effectuons une extraction des ARNs totaux sur lesquels est réalisée une RT-PCR.
Les ADNc obtenus sont traités afin d'obtenir une librairie NGS, des contrôles qualité sont effectués afin de vérifier la quantité de matériel et la longueur des fragments composant la librairie.
Une normalisation des librairies est réalisée afin d'uniformiser les quantités déposées sur la flow-cell.
Après séquençage des librairies sur un appareil Illumina MiSeq, les données sont traitées bioinformatiquement afin de déterminer les différentes séquences attendues.
Le rapport fourni contient selon vos demandes :
- Les séquences nucléotidiques annotées des domaines des chaînes lourdes et légères, selon votre besoin.
- La profondeur de lecture reflétant le degré de fiabilité de chaque base
- Les séquences protéiques correspondantes
- Une confirmation de la productivité de la chaîne lourde ou légère par bio-informatique.
- S'il y a lieu les autres séquences nucléotidiques et protéiques productives
Nos méthodologies nous permettent de répondre à tous vos besoins de séquençage d'anticorps, du séquençage d'hybridome unique à la grande série.
Nous pouvons également procéder à l'analyse des cultures d'anticorps polyclonaux.
Méthode par clonage
Nos prestations de base vous permettent d'obtenir les séquences nucléotidiques de vos domaines variables, lourds et légers.
Nous proposons sur demande d'autres options telles que :
- La séquence Leader
- Les domaines constants de la chaîne lourde (CH1, CH2, CH3)
- Le domaine constant de la chaînes légère (CL)
Méthode NGS haut débit
Notre approche haut débit du séquençage d'anticorps vous permet de séquencer de 24 à 384 hybridomes dans une seule analyse.
Pour plus de renseignements et une tarification personnalisée, merci de nous contacter par e-mail ou par téléphone aux coordonnées indiquées sur notre page contact.
